PCR diagnostika (polymerázová řetězová reakce)

Jednou z neustálých otázek našich specialistů je možnost použití takové laboratorní diagnostické metody, jako je PCR. Podívejme se v tomto článku na ty nejrelevantnější.

Vymezení pojmu diagnostika metodou PCR

PCR analýza (polymerázová řetězová reakce) — je vysoce přesná metoda pro diagnostiku četných infekcí na základě analýzy genetického materiálu (DNA a RNA).

Mezi poslední patří:

• krev a její složky;
• sliny
• sputum;
• sekrece genitálií.

Mohou být také použity jiné biologické materiály v závislosti na místě studie a účelu PCR.

Jaké procesy pomáhají identifikovat nádorové markery při studiu poměru subpopulací leukocytů?

Jedním z ukazatelů přítomnosti onkologického procesu v těle je studium číselné hodnoty poměru subpopulací leukocytů. Jejich abnormální množství se může stát indikátorem nebo markerem, v podstatě onkomarkerem. Výzkumné informace se významně liší mezi normálními a patologickými stavy.

Například hodnoty CD4+/CD8+ v rozsahu od 1,2 do 2,6 mohou dobře indikovat přítomnost mnohočetného myelomu nebo velkého nádoru (možná více než jednoho) v těle osoby. Významné zvýšení indikátoru nad 3 může znamenat akutní T-lymfoblastickou leukémii a možná chronickou T-leukémii.

To vše znamená specifický informační obsah v převaze T-helper buněk nad T-killery. Nádorové markery ale mohou být i genetické. V moderní diagnostice byly objeveny tisíce mutovaných alel genů. Právě ony mohou s určitou mírou pravděpodobnosti vést k rozvoji onkologického procesu. Pokud je nutné identifikovat nádorové markery, můžete použít četné testovací systémy od kteréhokoli z výrobců.

Je vhodné předcházet rakovině děložního čípku nebo provádět potřebné manipulace pro její včasnou diagnostiku. K dosažení tohoto cíle je nutné vyvinout a zavést státní programy pro plošný screening žen k detekci HPV. Cytologická vyšetření by měla být prováděna pravidelně. Odborníci se domnívají, že očkování, které by mělo být provedeno u chlapců a dívek ihned po narození, může pomoci předcházet onemocnění.

Je možné pomocí této metody identifikovat nebezpečné infekce, které by mohly vést k resuscitaci?

Screening působí proti jakýmkoli nebezpečným infekcím, které mohou vést ke kritickému stavu pacienta. Při včasném odhalení infekčního agens je možné správně a rychle změnit léčbu. Často právě to zachraňuje životy pacientů na jednotce intenzivní péče.

Je možné pomocí PCR potvrdit přítomnost onemocnění?

Stojí za zmínku, že screeningový test není zcela vhodný pro urgentní medicínu. Obecně se ideálně projevuje na preventivních hromadných akcích. Jejich hlavním cílem je v rané fázi identifikovat patologické procesy, které se navenek nijak neprojevují. Takové procesy mohou teprve začínat nebo se již mohou stát chronickými, maskovanými jako jiná nemoc.

V jakých oblastech tedy bude diagnostika PCR účinná:

• Gynekologie Pomocí této metody je možné detekovat lidský papilomavirus (HPV) v raných fázích vývoje. Screening je účinný i u sexuálně přenosných nemocí (STD).
• Infektologie. Metoda PCR je široce používána pro screeningové vyšetření krevní plazmy, které umožňuje detekci virů hepatitidy B, C, D, E.

Která metoda je účinnější: ELISA nebo IHL?

Stojí za zmínku, že podstatou metod ELISA a IHLA je identifikace nepřímých známek patologických změn, tzn. již následky nemoci. Ve skutečnosti je to jejich hlavní nevýhoda.

V reakci na jakýkoli dopad mikroorganismů tělo vytváří imunitní odpověď, produkuje protilátky, které pak mohou být detekovány. Při infekci však může nastat situace, kdy si proti ní tělo ještě nevytvořilo protilátky, nebo je jejich titr nízký a pod prahem citlivosti testovací soupravy. Existují dokonce situace, kdy tělo již patogen překonalo a v těle chybí, ale protilátky jsou nadále detekovány.

Proč je PCR považována za modernější metodu? Jeho vzhled byl mnohem pozdější než imunologické. V souladu s tím je specificita a senzitivita PCR mnohem vyšší než u předchozích imunologických metod. Kromě toho je PCR analýza schopna najít přímou kořenovou příčinu procesů – jejich genetický základ, nikoli důsledek.

Pro získání požadovaného výsledku pomocí PCR není nutné identifikovat celý cílový genom. K tomu existují další metody, jako je cílená analýza nebo analýza celého genomu pomocí sekvenování nové generace. PCR najde vysoce konzervovaný fragment DNA, který jednoznačně identifikuje povahu hledaného cíle. Pomocí PCR v reálném čase je možné určit počáteční množství cíle ve vzorku.

Proč se PCR vyplatí používat i pro multirezistentní kmeny mykobakterií?

Stanovení multirezistentních kmenů nám umožní vyloučit antibiotika, která mají geneticky podmíněnou rezistenci vůči patogenu již v prvních fázích léčby. Ve skutečnosti může ošetřující lékař okamžitě předepsat účinnější léky. Tím se výrazně zlepší proces léčby. Například kmeny Mycobacterium tuberculosis jsou již odolné vůči lékům, jako je Isoniazid a Rifampicin. To je důvod, proč stojí za to okamžitě začít používat fluorochinolony nebo používat injekční léky.

Je možné vyléčit citlivé kmeny HIV?

Stojí za zmínku, že virus lidské imunodeficience (HIV) je ze své podstaty odolný vůči antibakteriálním a antimikrobiálním lékům. HIV není bakterie, a proto je tak obtížné ho léčit.

Existují antivirotika speciálně vytvořená pro viry. Hlavní obtíž při léčbě virových onemocnění obecně a AIDS zvláště je způsobena jejich biologickými vlastnostmi. To znamená, že aktivní fáze životní aktivity viru může nastat pouze uvnitř živé buňky. Z tohoto důvodu mají virové částice vysokou úroveň ochrany před vnějším prostředím. Jejich zničení je možné pouze společně s buňkou, což znamená, že samostatné zničení je nemožné. V případě viru HIV je navíc zničena buňka imunitního systému.