Dekódování PCR analýzy hepatitidy C

Hepatitida C je virová infekce, která postihuje játra. Její projevy mohou být velmi rozmanité – od lehkého onemocnění, které bez léčby po pár týdnech odezní, až po závažné, chronické onemocnění, které bez speciální terapie může vést k rozvoji jaterní cirhózy a smrti pacienta. Chronická hepatitida C přitom často zůstává po dlouhou dobu asymptomatická a člověk nemusí ani tušit, že má tuto nemoc.

Aby bylo možné identifikovat maximální počet lidí infikovaných virem, provádí naše země screeningové vyšetření různých skupin populace na hepatitidu C. Jedná se o krevní test na protilátky, nazývá se také test anti-HCV. Screeningový test je diagnostický postup, který umožňuje s vysokou mírou pravděpodobnosti vyloučit onemocnění u lidí, kteří nemají zjevné příznaky. Jinými slovy, jedná se o laboratorní nebo přístrojovou metodu, která umožňuje rychlé, efektivní a levné vyšetření velkého počtu lidí, kteří si nestěžují, s cílem odhalit onemocnění v časném stádiu a vyléčit je v kratším čase a s lepší výsledky. Podobným příkladem je fluorografický screening dospělých k detekci plicních onemocnění (především tuberkulózy).

Takové screeningové metody však obvykle nejsou pro stanovení diagnózy definitivní a vyžadují další vyšetření. V případě hepatitidy C je takovým objasňujícím rozborem stanovení RNA viru hepatitidy C v krvi, což nám umožňuje přímo identifikovat samotný virus, respektive jeho genetický materiál.

Jak jsme již mnohokrát na našem blogu zmínili, pouhá přítomnost protilátek nestačí ke stanovení diagnózy u většiny infekcí. Faktem je, že protilátky se tvoří jako ochranná reakce těla na pronikání cizího činidla a mohou přetrvávat velmi dlouho i po zotavení. Člověk, který má při screeningovém vyšetření zjištěny protilátky proti hepatitidě C, tedy nemusí mít virus v krvi, a tedy ani nemoc samotnou. To je možné, pokud nemoc prodělala akutní formu a imunitní systém se dokázal viru zbavit sám bez pomoci léků. K samovyléčení virové hepatitidy C bohužel dochází poměrně zřídka – asi 15–20 % všech případů infekce virem. Pozitivní test na protilátky proti HCV také obvykle přetrvává dlouhou dobu u lidí, kteří se zotavili z hepatitidy po léčbě antivirotiky. Za účelem objasnění, zda je virus stále přítomen v těle pacienta, lékař předepíše analýzu – PCR RNA viru hepatitidy C Detekce RNA viru hepatitidy C v krvi bude indikovat přítomnost aktivního onemocnění, které vyžaduje zahájení specifické terapie.

Krev lze testovat na RNA pomocí kvalitativních i kvantitativních metod. Jak název napovídá, kvalitativní metoda odpovídá pouze na otázku, zda je virus v těle přítomen; Při studiu pomocí kvantitativní metody získáme informace o tom, kolik přesně jednotek viru je obsaženo v 1 ml krve, to znamená, že můžeme posoudit, jak aktivně se virus reprodukuje.

Kromě testování HCV RNA se před léčbou doporučuje také určit genotyp viru. Virus hepatitidy C má 6 genotypů a velké množství podtypů. U nás jsou nejčastější genotypy 1, 2 a 3. Hlavní informace, které výsledky tohoto rozboru lékaři dávají, je to, na jaké léky je virus citlivý, to znamená, že rozhoduje o volbě správného léčebného režimu. Samozřejmě v dnešní době již existují tzv. „pan-genotypová“ schémata, která jsou účinná proti všem genotypům viru. Pokud je však znám genotyp viru, výrazně se rozšiřuje počet režimů, ze kterých lze vybrat ten nejvhodnější pro každého konkrétního pacienta (s přihlédnutím k doprovodným onemocněním a dalším lékům, které pacient užívá). Tento výsledek také poskytuje další informace pro další sledování pacienta. Pokud je virus po léčbě znovu detekován, je možné s větší jistotou určit, zda se jedná o selhání léčby nebo o reinfekci. Proto moderní doporučení pro léčbu hepatitidy C jak v Evropě, tak v Americe doporučují genotypizaci před zahájením terapie.

Kromě testování před léčbou je k posouzení výsledků léčby nezbytné testování HCV RNA PCR. Jak již bylo zmíněno, anti HCV (protilátky proti viru hepatitidy C) v tomto případě zůstane s největší pravděpodobností pozitivní, a proto neposkytuje lékaři žádné cenné informace. Kritériem pro úplné uzdravení je nepřítomnost viru v krvi 12 týdnů po průběhu terapie.

Chtěl bych poznamenat, že pokud jsou ve vaší krvi zjištěny protilátky proti hepatitidě C, i když se cítíte naprosto normálně, měli byste se poradit s lékařem o dalším vyšetření. Pomalý zánět v játrech vede dříve či později k restrukturalizaci tkáně, zhoršení funkce a v konečném důsledku k rozvoji cirhózy. Stávající léčebné režimy hepatitidy C umožňují zbavit se viru v relativně krátké době (obvykle do 3 měsíců), s minimální pravděpodobností nežádoucích účinků a vysokou účinností. Proto je léčba chronické hepatitidy C v současnosti doporučována všem pacientům se spolehlivě stanovenou diagnózou.

Autor: specialistka na infekční onemocnění na H-Clinic University Clinic, Svetlana Yuryevna Degtyareva.

Lékařský redaktor: přednosta Univerzitní kliniky, kandidát lékařských věd, specialista na infekční choroby Danila Sergejevič Konnov.

Krevní test na hepatitidu C (HCV-genotyp) určení typu

Diagnostika genotypu HCV je prováděna na základě molekulárně genetické studie za účelem stanovení genotypizace viru hepatitidy C. Je indikována pro stanovení stadia jaterních onemocnění, jejich léčbu a další predikci možných relapsů.

Postup je předepsán pacientům v následujících případech:

• plánování terapeutického průběhu léčby pro specifický genotyp viru;
• výběr léků;
• sledování prognózy zvolené léčebné metody;
• nutnost provést biopsii postižených oblastí jater.

Studie je také předepsána, pokud existuje podezření na virus hepatitidy C, detekce genotypu RNA a výběr antivirové terapie.

Charakteristika studia:

• Typ biomateriálu: krevní sérum
• Synonyma (rus): HCV, virus hepatitidy C, genotyp HCV
• Synonyma (eng): Podtyp HCV, Virus hepatitidy C, Genotypizace HCV
• Metody výzkumu: PCR
• Jednotky měření: IU/ml
• Doba realizace: 6 dní

Virus hepatitidy C může postihnout játra a některé části krevních buněk a téměř vždy se vyvine do chronické formy onemocnění. Při správné terapii dokáže 45 % pacientů nemoc účinně léčit.

V současné době je základem pro studium onemocnění klasifikace vědce R. Simmonse, která identifikuje 6 základních genotypů viru C a mnoho dalších jeho podtypů. Aby se zajistilo, že nesprávně zvolená léčba neurychlí vývoj onemocnění a nevede ke komplikacím, existuje rozbor, který pomáhá určit přesný typ genotypu. Nejrozšířenější ve světě je genotyp 1 hepatitidy C, je se vyskytuje u 40 až 90 % pacientů. V Ruské federaci jsou běžné 3 genotypy tohoto viru, ale nejčastější je genotyp 1b.

V současné době bylo dosaženo jasného pokroku v léčbě hepatitidy C, protože byla vyvinuta nová antivirotika. Od roku 2014 by v souladu s doporučením Ministerstva zdravotnictví Ruské federace měla být tato výzkumná metoda používána u všech pacientů, kteří mají podstoupit antivirovou terapii.

Přesné stanovení genotypu viru C je tím správným krokem ke správné léčbě a pohodlnému životu pacienta.

Virus se můžete nakazit při stomatologických zákrocích, při jakémkoli typu injekce, potratu, krevní transfuzi a mnoha dalších zákrocích. Virus se také může přenést během porodu, pohlavním stykem nebo poškozením kůže a sliznic v každodenním životě.

Riziková skupina zahrnuje pacienty:

• kteří podstupují hemodialýzu;
• drogová závislost;
• hemofilie.

Ve zvýšeném riziku jsou také zdravotničtí pracovníci, kteří mají kontakt s krví pacientů.

Hlavní cíl analýzy

Při testování na virus hepatitidy C hraje hlavní roli množství viru v biomateriálu pacienta a jeho příslušnost k určitému genotypu.

Indikace pro testování genotypu HCV

Analýza k určení genotypu viru C by měla být provedena pro:

• detekce aktivity viru;
• určení typu léčby;
• získávání informací o reakci těla na léčbu;
• detekovat množství viru v krevní plazmě;
• sestavení léčebného plánu;
• stanovení dávkování léků;
• rozhodování o nutnosti provedení jaterní biopsie.

Studium je předepsáno za účelem:

• potvrzení pozitivního kvalitativního testu na přítomnost RNA viru HCV v krvi;
• posouzení stupně onemocnění;
• výběr komplexních metod léčby;
• diagnostika progrese patologie;
• předpovídá další infekci.

Kdy je nejlepší udělat test?

První test ukáže, zda je virus v krvi do 12 dnů po infekci.

Kdo předepisuje analýzu?

Tato metoda výzkumu je předepsána ošetřujícím lékařem, specialistou na infekční onemocnění nebo hepatologem.

Příprava analýzy

Chcete-li získat správný výsledek Na test je nutné se řádně připravit:

• den před testem byste se měli vyvarovat pití alkoholu, užívání léků, tučných a uzených jídel a také necvičit;
• Hodinu před darováním krve nepijte kávu, silný čaj, sycené nápoje a nekuřte;
• test byste neměli podstupovat po masáži, biopsii, kolposkopii, gastroskopii, laserovém odstranění chloupků, soláriu, rentgenu, ultrazvuku, fyzioterapii, manuálním a rektálním vyšetření;
• Vyhněte se stresovým situacím hodinu před vyšetřením.

Vše výše uvedené může vést k nesprávným výsledkům testu. Tento postup nemá žádné kontraindikace.

Metodika testování

Analýza se provádí podle jasně definovaného algoritmu akcí:

• Biomateriál se shromažďuje ve zkumavce. Do krve se přidávají speciální látky, částice DNA nebo RNA a volné nukleotidy;
• výsledná kompozice se zahřeje na 95 stupňů tak, aby se obě vlákna DNA oddělila;
• Po zahřátí se materiál ochladí. Během procesu chlazení polymeráza nachází jednotlivé části nukleotidů, to je možné pouze na jediném řetězci DNA, protože proces nefunguje na šroubovici;
• Další fází analýzy je opětovné zahřátí, které opět oddělí nukleotidy. S tímto probíhajícím procesem se zvyšuje počet genů hepatitidy C;
• Poslední fází testování je čištění. Částice se oddělují pomocí elektroforézy, čímž se rozdělí na molekuly.

Tato analýza nám umožňuje určit přítomnost viru v krvi a jeho typ.

Dekódovací indikátory pro hepatitidu C s určením typu

Diagnóza je kvalitativní posouzení genotypizace viru hepatitidy C podle typů 1, 2, 3. Pokud je u pacienta zjištěno 4-6 genetických typů viru, závěr uvádí: „Virus nezjištěn (studované genotypy 1, 2, 3)“.

Výsledky testů

Pokud jsou výsledky 60 IU/ml, znamená to, že byla zjištěna hepatitida C.

Pokud je výsledek testu 1600 IU/ml, byl detekován genotyp 2 nebo 3, a pokud je výsledek testu 5000 IU/ml, pak byl detekován jeden z genotypů 1a, 1b, 4, 5, 6.

Přesnou interpretaci analýzy je nejlepší objasnit se svým lékařem, protože pouze odborník může přesně interpretovat výsledky analýzy a poskytnout vyčerpávající komentáře.

Význam analýzy hepatitidy C s genotypizací

1. Genotypicita 1 Indikátor indikuje vysoké riziko infekce, komplexní průběh onemocnění ve formě komplikací.
2. Genotyp 2, 3 Virus hepatitidy C je úspěšně léčitelný; Terapeutický efekt lze hodnotit jako pozitivní výsledek po 6 měsících.
3. Hepatitida C není ve vzorku zapsána. Výsledek analýzy naznačuje potřebu dalšího výzkumu k vyloučení vzácných genotypů viru (4-6) kromě 1, 2, 3.

Nositelé genotypu 1 jsou infikováni virem hepatitidy C v průměru v 90 % případů, nositelé genotypu 2 a 3 jsou infikováni v rozmezí 33–50 %. Onemocnění jater způsobená genotypem 1 jsou velmi závažná a obtížně léčitelná. U pacientů je často diagnostikován hepatocelulární karcinom a jaterní cirhóza.

Negativní výsledek

Někdy může test ukázat negativní výsledek nebo falešně negativní výsledek. To se může stát v následujících případech:

• pokud je množství viru hepatitidy C nedostatečné k tomu, aby byl test citlivý;
• nepřítomnost viru v krevní plazmě;
• užívání antivirových léků;
• špinavý biomateriál;
• přítomnost heparinu v materiálu.

Délka terapie

Pokud je test na onemocnění pozitivní, je pacientovi předepsána léčba, která závisí na identifikovaném genotypu:

• Pokud analýza odhalí genotyp 1a nebo 1b, znamená to, že je během prvních 48 týdnů nutná intenzivní terapie. Genotyp 1b je nejagresivnější, protože se ve většině případů stává chronickým;
• pokud test identifikuje genotyp 2 nebo 3a viru „C“, je pacientovi podávána terapie po dobu 24 týdnů;
• Při stanovení genotypu 4 je léčba předepsána individuálně, protože tento typ je odolný vůči lékům. Genotyp je považován za agresivní, takže terapie se provádí po dobu 48 týdnů.

Jsou případy, kdy se pacient s genotypem 2a vyléčí sám, jelikož má silný imunitní systém. K tomu dochází v 10 % všech případů.

Co může ovlivnit výsledek?

Falešně pozitivní výsledek testu, ve kterém není možné určit genotypii viru, se vyskytuje v následujících případech:

• nízký obsah viru v testovaném materiálu (˂ 600 IU/ml);
• nesprávný sběr, skladování výzkumného materiálu nebo jeho kontaminace.

Genotypicita viru C je spolehlivou prognózou rozvoje infekce HCV v těle a odpovědi na antivirovou terapii. Stanovení genotypu umožňuje určit průběh a délku léčby, což je nezbytné vzhledem k širokému spektru nežádoucích účinků léků a také nízké toleranci některých léků pacienty.

Prognóza léčby hepatitidy C

Lidé, u kterých byl diagnostikován virus hepatitidy C subtypu 3, mají zvýšené hladiny ALT, infekci žlučových cest a výraznou steatózu.

Pokud jsou pacienti s HCV genotypem 1 léčeni Interferonem, bude pozitivita diagnostického testu HCV-GENOTYPE pozorována v průměru v 18 % případů.

U 28 % pacientů se 4-6 genotypizací hepatitidy C a u 66 % nositelů genotypu 1 v laboratorních zprávách bude výsledek testu pozitivní při kombinované terapii s léky „Ribavirin“, „Interferon“.